Απάντηση:
Τυπικά αυτό είναι μια δοκιμή ειδικότητας αντισώματος.
Εξήγηση:
Σε μια δοκιμασία ELISA είναι πολύ δύσκολο να καταλάβετε αν το αντίσωμα συνδέεται ή όχι με την πρωτεΐνη που σας ενδιαφέρει, με μια εντελώς διαφορετική πρωτεΐνη ή με μια σειρά πρωτεϊνών.
Το στύπωμα Western θα χρησιμοποιηθεί για να ελέγξει την ειδικότητα του αντισώματος (πρέπει να σημειώσετε ότι το στύπωμα Western δεν μπορεί να ανιχνεύσει όλες τις διασταυρούμενες αντιδράσεις με λανθασμένες πρωτεΐνες).
Στο στύπωμα Western, μπορείτε να δείτε το μέγεθος της πρωτεΐνης στην οποία το αντίσωμα είναι δεσμευτικό (δεν μπορείτε σε μια ELISA). Επομένως, για παράδειγμα, αν το αντίσωμα σας πρέπει να είναι δεσμευτικό σε μια πρωτεΐνη των 56 kDa και βλέπετε μια ζώνη στα ~ 56 kDa στο κηλίδα τότε μπορείτε να είστε αρκετά σίγουροι ότι το αντίσωμα είναι δεσμευτικό στη σωστή πρωτεΐνη.
Εάν, από την άλλη πλευρά, είδατε μια ζώνη στα 32 kDa, θα μπορούσατε να συμπεράνετε ότι το αντίσωμα είναι δεσμευτικό στην λανθασμένη πρωτεΐνη. Ομοίως, αν εμφανιστούν πολλές ζώνες στο στύπωμα Western, αυτό θα υποδηλώνει (σε περίπτωση απουσίας υποβάθμισης πρωτεΐνης) ότι το αντίσωμα ήταν δεσμευτικό σε μια σειρά διαφορετικών πρωτεϊνών.
Στο παράδειγμα της ταινίας των 32kDa που εμφανίζεται στο πήκτωμα και επίσης στις πολλαπλές ζώνες, θα πρότεινε ότι το αντίσωμα δεν έχει εξειδίκευση για τη ELISA και ότι οποιαδήποτε αποτελέσματα που παρατηρούνται στην ELISA δεν μπορεί να είναι συγκεκριμένα για την πρωτεΐνη που μας ενδιαφέρει.
Εάν είχα τρέξει αυτό το είδος της δοκιμής, μπορεί να συμπεριλάβω κάποιο είδος αντιδραστηρίου "παρεμβολής" για να ελέγξω το αντίσωμα. Για παράδειγμα, αν είχα αυξήσει το αντίσωμα μου σε ένα πεπτίδιο, μπορεί να συμπεριλάβει το πεπτίδιο στο διάλυμα πρωτεύοντος αντισώματος για να ελεγχθεί η σωστή σύνδεση. Δηλαδή, παρουσία του πεπτιδίου δεν θα πρέπει να βλέπω ζώνη ή κανένα αποτέλεσμα από την ELISA καθώς το πρωτογενές αντίσωμα μου θα ήταν ανίκανο να δεσμευθεί λόγω της παρουσίας περίσσειας του πεπτιδίου.
Όταν χρησιμοποιώ την υποτακτική διάθεση, πρέπει να χρησιμοποιήσω το γυμνό απλό ή απλό παρελθόν; Για παράδειγμα, είναι σωστό να πείτε: "Θα ήθελα να είχα την ευκαιρία να πάω μαζί σας". Ή, "Θα ήθελα να έχω την ευκαιρία να πάω μαζί σου";
Εξαρτάται από τον χρόνο που χρειάζεστε για να έχετε την πρόταση νόημα. Δείτε παρακάτω: Η υποκειμενική διάθεση είναι αυτή που ασχολείται με την πραγματικότητα που επιθυμούμε. Αυτό αντιτίθεται στην ενδεικτική διάθεση που ασχολείται με την πραγματικότητα όπως είναι. Υπάρχουν διαφορετικές χρονικές στιγμές μέσα στην υποκειμενική διάθεση. Ας χρησιμοποιήσουμε αυτά που προτείναμε παραπάνω και δούμε πώς θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν: «Θα ήθελα να έχω την ευκαιρία να πάω μαζί σας». Αυτό χρησιμοποιεί μια προηγούμενη υποκειμενική διάθεση και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί σε αυτή την ανταλλαγή μεταξύ ενός αγοριού και ενός π
Γιατί το GAPDH χρησιμοποιείται στο Western Blot; + Παράδειγμα
Το GAPDH χρησιμοποιείται συχνά ως έλεγχος φόρτωσης. Σε στύπωμα Western χρησιμοποιούμε συχνά GAPDH ως έλεγχο φόρτωσης. Αυτό σημαίνει ότι με την ανίχνευση για το GAPDH μπορούμε να ελέγξουμε ότι έχουμε φορτωμένες ισοδύναμες ποσότητες πρωτεϊνών σε διαφορετικές λωρίδες του στυπώματος. Ένα παράδειγμα χρήσης - ας πούμε ότι έχουμε μια ασθένεια που πιστεύουμε ότι προκαλεί αύξηση της συγκεκριμένης πρωτεΐνης στο κύτταρο. Θα δημιουργούσαμε ένα δείγμα από "υγιή" κύτταρα και ένα άλλο δείγμα από "άρρωστα" κύτταρα. Στη συνέχεια θα φορτώσαμε ισοδύναμες ποσότητες πρωτεΐνης και των δύο δειγμάτων σε ένα πήκτωμα για το στύπ
Γιατί χρησιμοποιείται επίσημη χρέωση; + Παράδειγμα
Επειδή μας δίνει μια ιδέα της ηλεκτρονικής δομής. Φυσικά, η επίσημη κατηγορία είναι ένας φορμαλισμός. Αυτό δεν έχει καμία πραγματική ύπαρξη, αλλά η έννοια μπορεί να είναι χρήσιμη για να καταλάβει τη δομή και τη σύνδεση. Εισάγουμε πολύ νωρίς την ιδέα ότι η "ομοιοπολική σύνδεση" προκύπτει από την κατανομή ηλεκτρονίων και την "ιοντική δέσμευση" από τη μεταφορά ηλεκτρονίων. Έτσι, το ουδέτερο μόριο μεθάνιο, CH_4, δεν έχει διαχωρισμό φορτίου, και το ιονικό είδος NaCl, μπορεί να αναπαρασταθεί ως Na ^ (+) Cl ^ (-). Για να διατηρηθεί το μεθάνιο ως παράδειγμα, το μόριο του μεθανίου έχει συνολικά 10 ηλεκτρόνια: 6