Στη δοκιμή ELISA, τι κάνουν τα πρωτεύοντα αντισώματα και τα δευτερογενή αντισώματα;

Στη δοκιμή ELISA, τι κάνουν τα πρωτεύοντα αντισώματα και τα δευτερογενή αντισώματα;
Anonim

Απάντηση:

Αυτό εξαρτάται από τον τύπο της ανάλυσης ELISA.

Εξήγηση:

ELISA = Ανίχνευση ανοσοπροσρόφησης συνδεδεμένη με ένζυμο.

Υπάρχουν διαφορετικοί τύποι προσδιορισμών ELISA. Αυτό που χρειάζεστε είναι:

  • αντισώματος με ένα ένζυμο συνδεδεμένο με αυτό
  • αντιγόνο στο οποίο δεσμεύεται το αντίσωμα
  • υπόστρωμα του ενζύμου που προκαλεί μετρήσιμη αντίδραση

ο ένζυμο συνδεδεμένο με το αντίσωμα είναι συχνά HRP (υπεροξειδάση αρμορακίας). Το HRP μπορεί να αντιδράσει με διαφορετικά υποστρώματα που είτε αλλάζουν χρώμα είτε εκπέμπουν φως, και τα δύο μετρήσιμα.

Η εικόνα παρουσιάζει μια επισκόπηση του ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΙ ΤΥΠΟΙ των αναλύσεων ELISA. Θα εξηγήσω πώς λειτουργούν παρακάτω.

Άμεση ELISA

Μια πλάκα επικαλύπτεται με το αντιγόνο (Ag) και α πρωτεύον αντίσωμα με ένζυμο προστίθεται. Όταν προστεθεί το υπόστρωμα, η αντίδραση θα συμβεί και θα είναι ανάλογη προς την αλληλεπίδραση μεταξύ αντιγόνου-αντιγόνου.

Έμμεση ELISA

Και πάλι, μια πλάκα επικαλύπτεται με το αντιγόνο και α πρωτεύον αντίσωμα δεσμεύεται στο αντιγόνο. ΕΝΑ δευτερογενές αντίσωμα που προστίθεται ότι προσδένεται στο πρώτο αντίσωμα. Το 2ο αντίσωμα περιέχει το ένζυμο που αντιδρά με το υπόστρωμα.

Σάντουιτς ELISA

Εδώ εμπλέκονται δύο ή τρία αντισώματα. Ένα αντίσωμα σύλληψης συνδέεται με πλάκες και δεσμεύεται με το αντιγόνο. Αυτό ακολουθείται από τα ίδια στάδια όπως είτε η άμεση (μόνο μία αντίσωμα) είτε η έμμεση μέθοδος (δύο αντισώματα).

Ανταγωνιστική ELISA

Μερικές φορές ονομάζεται ELISA αναστολής, είναι λίγο πιο περίπλοκο. Μια πλάκα επικαλύπτεται με το προς ανίχνευση αντιγόνο. ΕΝΑ πρωτεύον αντίσωμα με το ένζυμο πρώτα επωάζεται με ένα δείγμα με μια άγνωστη συγκέντρωση του ίδιου αντιγόνου. Αυτό στη συνέχεια προστίθεται στην πλάκα, επιτρέποντας στα αντισώματα που είναι ακόμα ελεύθερα να αντιδράσουν με το αντιγόνο στην πλάκα. Αφού εκπλυθούν τα σύμπλοκα αντισώματος-αντιγόνου του δείγματος, προστίθεται το υπόστρωμα.

Όταν το άγνωστο δείγμα έχει πολύ αντιγόνο, θα υπάρχει λιγότερο αντίσωμα ελεύθερο να δεσμεύεται με το σήμα χαμηλότερης πλάκας.