Τι είναι η ανταλλαγή ιόντων χρωματογραφίας; + Παράδειγμα

Τι είναι η ανταλλαγή ιόντων χρωματογραφίας; + Παράδειγμα
Anonim

Απάντηση:

Πρόκειται για μια διαδικασία διαχωρισμού διαφορετικών πρωτεϊνών με βάση τις ιδιότητες φόρτισης και δέσμευσης σε ένα υλικό.

Εξήγηση:

Σε διαφορετικά ρΗ διαφορετικές πρωτεΐνες φέρουν διαφορετικά φορτία. Τοποθετώντας ένα μείγμα πρωτεϊνών σε ένα ρυθμισμένο ρΗ, μπορείτε να έχετε ένα μείγμα που περιέχει πρωτεΐνες με διαφορετικές ιδιότητες φορτίου.

Εάν αυτό το μείγμα πρωτεϊνών χυθεί σε μια στήλη που περιέχει ένα υλικό με ένα φορτίο πάνω του, η στήλη δεσμεύει τις πρωτεΐνες μέσα σε αντίθετο φορτίο.

Στη συνέχεια μπορείτε να χρησιμοποιήσετε διαφορετικά διαλύματα που περιέχουν διαφορετικές ποσότητες ιόντων για να εκλούσετε (αποκολλήσετε) τις πρωτεΐνες από τη στήλη.

Για παράδειγμα, λέτε ότι είχατε ένα μείγμα πρωτεϊνών από το οποίο θέλετε να καθαρίσετε μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη. Εάν γνωρίζατε ότι σε ένα συγκεκριμένο pH η πρωτεΐνη ενδιαφέροντος σας ήταν θετικά φορτισμένη θα μπορούσατε να ρίξετε το μίγμα σε μια στήλη που περιείχε αρνητικά φορτισμένο υλικό.

Όλες οι πρωτεΐνες που δεν φέρουν φορτίο, ή όταν έχουν αρνητικά φορτιστεί, θα ρέουν κατευθείαν μέσω της στήλης. Θα μπορούσατε στη συνέχεια να απελευθερώσετε τη θετικά φορτισμένη πρωτεΐνη σας με την πλημμύρα της στήλης με θετικά ιόντα που θα συμπληρώνουν το αρνητικό φορτίο στη στήλη. Αυτός ο ανταγωνισμός θα προκαλούσε τότε την έκλουση της πρωτεΐνης ενδιαφέροντος.

Ακολουθεί ένα παράδειγμα αυτού του γεγονότος.

Κάθε δίσκος περιέχει ένα ρυθμιστικό διάλυμα σε διαφορετική συγκέντρωση και όπως φαίνεται στο δείγμα των 175 mM (άνω αριστερή γωνία) πολύ μικρή ερυθρά / καστανή πρωτεΐνη έχει προσδεθεί στη φορτισμένη μεμβράνη καθώς υπάρχει ανταγωνισμός μεταξύ των ιόντων στο ρυθμιστικό διάλυμα και του πρωτεΐνη για τις φορτισμένες θέσεις πρόσδεσης στη μεμβράνη (Τα ιόντα στο ρυθμιστικό έχουν "κερδίσει" επειδή υπάρχουν περισσότερα από αυτά και έτσι έχουν αποτρέψει τη σύνδεση της πρωτεΐνης). Στο δείγμα στο κάτω δεξιό μέρος πολλών πρωτεϊνών έχει συνδεθεί με τη μεμβράνη επειδή υπάρχουν λιγότερα ιόντα που υπάρχουν για να ανταγωνίζονται για θέσεις δέσμευσης.

Σε αυτό το βίντεο μπορείτε να δείτε τη χρωματογραφία ανταλλαγής ανιόντων σε λειτουργία: